Diagnosticum Vi-antigjenik i salmonelës së eritrociteve për RPGA. (Instituti Kërkimor i Epidemiologjisë dhe Mikrobiologjisë me emrin Pasteur)

Diagnosticum Vi-antigjenik i salmonelës së eritrociteve për RPGA

Set i reagentëve "Diagnosticum eritrocite Salmonella Vi-antigjen për RPHA" (SED-Vi)

Qëllimi

Seti i reagentëve është krijuar për të zbuluar antitrupat ndaj antigjenit Vi të agjentit shkaktar të etheve tifoide në serumin e gjakut në një reaksion hemaglutinimi pasiv (RPHA).

Parimi i metodës

Në prani të antitrupave ndaj antigjenit Vi të agjentit shkaktar të etheve tifoide, vërehet hemaglutinim i eritrociteve të pulës të sensibilizuar me antigjenin Vi. Kjo çon në formimin e një "ombrelle" të qelizave të kuqe të gjakut të vendosura në fund të puseve të pllakës me një fund në formë U. Në mungesë të antitrupave ndaj antigjenit Vi të agjentit shkaktar të etheve tifoide, qelizat e kuqe të gjakut të vendosura formojnë një "pikë".

Karakteristikat e kompletit

Kompleti është krijuar për të testuar 42 serume gjaku në versionin e shqyrtimit ose 10 serume gjaku në versionin e titrimit.

Masat paraprake

Kompleti është menduar vetëm për përdorim diagnostik in vitro. Komponentët e kompletit janë të sigurt, por serumet e gjakut të testuara, si dhe reagentët, pajisjet dhe instrumentet që ranë në kontakt me to, mund të përfaqësojnë material potencialisht infektiv. Kur punoni me ta, duhet të merren masat paraprake të mëposhtme:

* punoni me doreza gome;

* Pas përfundimit të punës, mostrat e serumit të gjakut të testuar, reagentët dhe instrumentet në kontakt me to dezinfektohen me solucione prej 6% peroksid hidrogjeni ose 70% alkool etilik, ose 3% kloraminë B në përputhje me SP 1.3.2322-08.

Kur punoni me kompletin, duhet të ndiqni "Rregullat e projektimit, masat paraprake të sigurisë, higjienën industriale, regjimin anti-epidemik dhe higjienën personale kur punoni në laboratorë (departamente, departamente) të institucioneve sanitare dhe epidemiologjike të Ministrisë së Shëndetësisë së BRSS" ( Moskë, 1981).

Kryerja e analizave

Përgatitja e mostrave të provës

Mostrat e serumit të gjakut në studim ruhen në një temperaturë prej 2 deri në 8 °C për jo më shumë se 3 ditë nga momenti i marrjes së gjakut. Hirra mund të ruhet e ngrirë në një temperaturë prej minus 18 °C e më poshtë për jo më shumë se 1 vit. Para përdorimit, mostrat shkrihen në temperaturën e dhomës dhe përzihen duke tundur. Ri-ngrirja nuk lejohet. Mostrat me rritje të theksuar bakteriale nuk duhet të përdoren.

Përgatitja e serumit të kontrollit (K+)

Përgatitni një tretësirë ​​pune të serumit të Salmonellës të përthithur nga receptori Vi (K+) në një hollim 1:10. Për ta bërë këtë, përmbajtja e shishes me K+ tretet duke shtuar 1 ml tretësirë ​​PBS. Ruani (alikuate 0,2 ml) të ngrira në një temperaturë prej minus 18 ° C dhe më poshtë për jo më shumë se 6 muaj.

Përgatitja e diagnostikimit të eritrociteve (EDC)

Shtoni 0,6 ml ujë të distiluar në përmbajtjen e shishes SED dhe lëreni të hidratohet për 2 orë në temperaturën e dhomës. Më pas tretësirës i shtohen 2,4 ml tretësirë ​​PBS. Ruani në temperatura nga 2 deri në 8 °C jo më shumë se 6 muaj. Ngrirja nuk lejohet.

Deklarata e RPGA gjatë shqyrtimit të serumit

Serumet e gjakut për testet e shqyrtimit hollohen në puse të çiftëzuara të një pjate (për secilin serum përdoren dy puse) si më poshtë:

* Hollimet paraprake 1:20 përgatiten në puset e para duke shtuar në to fillimisht 190 μl tretësirë ​​RIP dhe më pas 10 μl serum provë dhe duke i përzier me tubacion tre herë (ngjyra e tretësirave në puse pas shtimit serumi duhet të ndryshojë nga blu-vjollcë në jeshile);

* Hollimet e skanimit prej 1:40 përgatiten në pusetat e dyta duke shtuar fillimisht 25 μl tretësirë ​​PBS në to dhe më pas 25 μl serum të holluar paraprakisht dhe duke i përzier me tubacion tre herë.

Sa herë që kryhet RPGA, është e nevojshme të kryhet një përcaktim kontrolli i titrit K+. Për ta bërë këtë, shtoni 50 μl zgjidhje PBS në 8 puse në një rresht të gjatë. Më pas në pusin e parë shtohen 50 μl tretësirë ​​pune K+, përzihen me pipetim dhe transferohen në puset e ardhshme në 50 μl, duke përftuar hollime 2-fish nga 1:20 deri në 1:2560. 50 μl tretësirë ​​PBS shtohen në 4 puse të tjera për të monitoruar EDS për mungesën e aglutinimit spontan.

25 μl SED shtohen në puset me hollime skanuese të serumeve të testimit dhe kontrolleve. Përziejeni suspensionin SED në një shishe ose banjë përpara përdorimit! Pas shtimit të SED, përmbajtja e puseve përzihet duke trokitur në skajin e pllakës. Tableta mbahet në temperaturën e dhomës për 30 - 40 minuta.

Llogaritja e rezultateve gjatë ekzaminimit të serumit të gjakut

Rezultatet merren parasysh duke përdorur një shkallë konvencionale prej katër kryqëzimesh:

* ++++ (4+) - qelizat e kuqe të gjakut formojnë një "ombrellë" të përmbysur në fund të vrimës, skajet e saj bien;

* +++ (3+) - qelizat e kuqe të gjakut formojnë një "ombrellë" të përmbysur në fund të vrimës, skajet e saj janë të njëtrajtshme;

* ++ (2+) - qelizat e kuqe të gjakut formojnë një unazë të hollë në fund të vrimës;

* + (1+) - qelizat e kuqe të gjakut formojnë një unazë ose disk të dendur në fund të vrimës;

* (-) - qelizat e kuqe të gjakut formojnë një pikë në fund të vrimës.

Hemaglutinimi i të paktën 3 (+++) kryqe konsiderohet si rezultat pozitiv.

Kontrolli i cilësisë së diagnostifikimit sigurohet nga 4 puse të rreshtit të kontrollit, në të cilat janë shtuar vetëm PBS dhe SED zgjidhje. Nuk duhet të ketë aglutinim spontan (-) në këto puse. Në këtë rast, studimi duhet të përsëritet. Nëse aglutinimi shfaqet gjatë testimit të përsëritur, atëherë ilaçi nuk përdoret.

Serumet me rezultat negativ duhet konsideruar se nuk përmbajnë antitrupa ndaj antigjenit Vi me një titër diagnostik 1:40 ose më të ulët.

Serumet që japin rezultat pozitiv në një hollim 1:40 duhet të riekzaminohen me titrim të serumit për të vendosur titrin e tij.

Pas-prodhimi i RPGA gjatë titrimit të serumeve të gjakut

Titrimi i serumit të provës dhe tretësirës së punës K+ kryhet në rreshta të shkurtër të tabletës. Një rresht tjetër i shkurtër përdoret për të kontrolluar mungesën e aglutinimit spontan të EDS.

Në puset e para të rreshtave të shkurtër shtohen 180 μl tretësirë ​​RIP për titrimin e serumeve të provës. Shtoni 50 μl tretësirë ​​PBS në të gjitha puset e tjera.

Për të kontrolluar testin diagnostik për mungesën e aglutinimit spontan, shtoni 50 μl tretësirë ​​PBS në puset e një rreshti të shkurtër.

20 μl serum testues shtohen në puset me tretësirën RIP. Çdo serum shtohet me një majë individuale dhe tretësira në pus përzihet me tubacion tre herë (ngjyra e tretësirave në puset duhet të ndryshojë nga blu-vjollcë në jeshile).

Shtoni 100 μl tretësirë ​​pune K+ në pusin e parë të një rreshti të shkurtër për titrimin e K+, shtoni 50 μl tretësirë ​​PBS në pusetat e mbetura.

Më pas, nga puset e para të rreshtave të shkurtër për serumin e testimit dhe serumin e kontrollit, 50 μl transferohen në puset e radhës, duke përftuar hollime të dyfishta nga 1:20 deri në 1:1280. Në fund të titrimit, tretësirat në vëllim 50 μl hiqen nga pusetat e fundit.

Shtoni 25 µl SED në të gjitha puset përveç puseve të para të çdo rreshti të shkurtër. Përziejeni suspensionin SED në një shishe ose banjë përpara përdorimit! Pas shtimit të SED, përmbajtja e puseve përzihet duke trokitur në skajin e pllakës. Tableta mbahet në temperaturën e dhomës për 30 - 40 minuta.

Kontabilizimi i rezultateve kur titroni serumet e gjakut

Titri i serumit konsiderohet të jetë hollimi i tij, i cili jep hemaglutinim të paktën 3 (+++) kryqe.

Kontrolli i cilësisë së diagnozës sigurohet nga puset e një rreshti të shkurtër për monitorimin e EDS. Nuk duhet të ketë aglutinim spontan (-) në këto puse. Përndryshe, studimi duhet të përsëritet me një diagnozë të një serie të ndryshme.

Personat që kanë antitrupa ndaj antigjenit Vi në një titër 1:40 ose më të lartë konsiderohen të dyshuar si bartës kronikë të patogjenit tifoide. Për një diagnozë përfundimtare është i nevojshëm një ekzaminim i thelluar bakteriologjik.

Kushtet e transportit dhe ruajtjes, data e skadencës

* Transporti në përputhje me SP.3.3.2.1248-03 në temperatura nga 2 deri në 8 °C. Transporti afatshkurtër (deri në 10 ditë) lejohet në temperatura nga 10 deri në 35 °C.

* Ruajtja në përputhje me SP 3.3.2.1248-03 në temperatura nga 2 deri në 8 °C.

Afati i ruajtjes - 1 vit. Pas datës së skadencës, kompleti i reagentëve nuk mund të përdoret.

Certifikata e regjistrimit nr RZN 2016/3905 dat 04.04.2016

Qëllimi

Kompleti i reagentëve "Diagnosticum eritrocite salmonella Vi-antigjen për RPHA" (SED-Vi) është menduar për zbulimin e antitrupave ndaj antigjenit Vi të agjentit shkaktar të etheve tifoide në serumin e gjakut të njeriut nga reagimi i hemaglutinimit pasiv (RPHA). ).

Karakteristikat e kompletit

Parimi i funksionimit

Në prani të antitrupave ndaj agjentit shkaktar të etheve tifoide, vërehet hemaglutinimi i eritrociteve të pulës të sensibilizuar me antigjenin Vi, gjë që çon në formimin e një "ombrelle" eritrocitesh të vendosura në fund të puseve në formë U të pllakës. . Në mungesë të antitrupave ndaj agjentit shkaktar të etheve tifoide, qelizat e kuqe të gjakut të vendosura formojnë një "pikë".

Vendosni përmbajtjen

Emri i reagentit	Përshkrim	Sasia në komplet
Diagnosticum eritrocite salmonella Vi-antigjen, i thatë 6% (EDS)	Eritrocitet e pulës të formalizuara të sensibilizuara me antigjenin S. typhi Vi. Masa higroskopike e thatë Kafe. Pas shpërbërjes, suspensioni ka ngjyrë të kuqe-kafe.	1 fl., nga 0.6 ml
Serumi diagnostikues i salmonelës i adsorbuar, receptor Vi, i thatë (i holluar 1:20, (K+))	Serum lepuri Salmonella e adsorbuar, receptor Vi, i holluar 1:20. Masa poroze e thatë higroskopike me ngjyrë të bardhë. Pas tretjes, është një lëng i qartë, i verdhë ose i pangjyrë.	1 fl., nga 0.3 ml
Diluenti i mostrës së testimit (RSD)	Lëng transparent me ngjyrë blu-vjollcë.	1 fl., 10 ml
Zgjidhje tampon fosfati (PBS)	Lëng transparent pa ngjyrë.	1 fl., 10 ml
Tableta polimere një përdorimshe për reaksione imunologjike	Tableta polimere një përdorimshe për reaksione imunologjike e bërë nga polistireni transparent pa ngjyrë.	1 PC.

Karakteristikat diagnostike

Diagnosticum duhet të aglutinohet në RPHA me serumin e salmonelës diagnostike të absorbuar, receptorin Vi, të thatë (hollimi 1:20), në titrin e treguar në etiketën e serumit. Niveli i kushtëzuar i karakteristikave diagnostike të serumit të gjakut njerëz të shëndetshëm Hollimi i serumit duhet të konsiderohet jo më i lartë se 1:20. Koha e analizës është 3040 minuta. Kompleti është krijuar për të testuar 42 serume gjaku në opsionin e shqyrtimit ose 10 serume gjaku në opsionin e titrimit.

Masat paraprake

Kompleti është menduar vetëm për përdorim diagnostik in vitro. Substancat e përfshira në komplet janë të çaktivizuara dhe të sigurta. Kur punoni me kompletin, duhet të respektoni SP 1.3.2322-08 dhe SanPiN 2.1.7.2790-10.

Pajisje dhe materiale shtesë

Pajisjet, materialet, zgjidhjet:

• Dispenzues me pipetë 1-kanalësh me volum dozimi të ndryshueshëm 5 - 40 µl; 40 - 200 µl; 200 - 1000 µl dhe 1000 - 5000 µl;
• Shpërndarës me pipetë me 8 ose 12 kanale me vëllime dozimi të ndryshueshme prej 5 - 40 µl dhe 40 - 200 µl;
• ujë i distiluar (GOST 6709-72).

Mostrat e analizuara

Mostrat e serumit të gjakut në studim ruhen në një temperaturë prej 2 deri në 8 °C për jo më shumë se 3 ditë nga momenti i marrjes së gjakut. Hirra mund të ruhet e ngrirë në një temperaturë jo më të madhe se minus 18 °C për jo më shumë se 1 vit. Para përdorimit, mostrat shkrihen në një temperaturë prej 16 deri në 25 °C dhe përzihen duke tundur. Ri-ngrirja nuk lejohet. Mostrat me rritje bakteriale dhe hemolizë nuk duhet të përdoren. Para kryerjes së reaksionit, serumet e provës nxehen në 56 °C për 30 minuta.

Kryerja e analizave

Përgatitja e serumit të kontrollit diagnostikues (K+)

Përgatitni një tretësirë ​​pune të serumit të Salmonellës diagnostike të adsorbuar, receptorit Vi, të thatë (hollimi 1:20) nga 0,3 ml (K+). Për ta bërë këtë, shtoni 0,3 ml tretësirë ​​tampon fosfati (PBS) në përmbajtjen e shishes me K+. Sasia e mbetur e serumit mund të ndahet dhe të ruhet e ngrirë në një temperaturë që nuk kalon minus 18 ° C për jo më shumë se 6 muaj.

Përgatitja e Salmonella eritrociteve Diagnosticum (SED)

Për të përgatitur një hollim pune të suspensionit Salmonella erythrocyte diagnosticum, 0,6 ml ujë të distiluar i shtohet përmbajtjes së shishes me SED të thatë 6% dhe lihet të hidratohet për 2 orë në një temperaturë prej 16 deri në 25 °C. Më pas tretësirës i shtohen 2,4 ml tretësirë ​​tampon fosfati (PBS). Tretësira e punës ruhet në një temperaturë prej 2 deri në 8 °C jo më shumë se 1 muaj. Ngrirja nuk lejohet.

Deklarata e RPGA gjatë ekzaminimit të serumeve të gjakut

Serumet e gjakut për studimet depistuese hollohen në pusetat e tabletës si më poshtë:

• Hollimet paraprake prej 1:20 përgatiten në pusetat e para të pllakës, duke shtuar fillimisht 190 μl tretësirë ​​RIP në to, më pas 10 μl serum testues. Çdo serum shtohet me një majë të veçantë dhe pipet me kujdes (ngjyra e tretësirës në puset pas shtimit të serumeve duhet të ndryshojë nga blu-vjollcë në jeshile);
• hollimet e skanimit prej 1:40 përgatiten në pusetat e dyta duke shtuar fillimisht 25 μl tretësirë ​​PBS në to, dhe më pas 25 μl serum të holluar paraprakisht dhe duke vënë me kujdes pipetën.

Sa herë që kryhet RPGA, është e nevojshme të kryhet një përcaktim kontrolli i titrit K+. Për ta bërë këtë, shtoni 50 μl zgjidhje PBS në 8 puse në një rresht të gjatë. Më pas në pusin e parë shtoni 50 μl tretësirë ​​pune K+ (1:20), pipet me kujdes dhe kaloj 50 μl në puset e ardhshme, duke përftuar hollime 2-fish nga 1:40 deri në 1:5120. Shtoni 50 μl tretësirë ​​PBS në 4 puse të tjera për të monitoruar EDS për mungesën e hemaglutinimit spontan.

25 μl SED shtohen në të gjitha pusetat e pllakës me hollimet skanuese të serumeve të testimit (përveç atyre të para që përmbajnë RIP) dhe kontrolleve. Përziejeni suspensionin SED në një shishe ose banjë përpara përdorimit! Tableta tundet mirë dhe lihet në një temperaturë prej 16 deri në 25 ° C për 30 - 40 minuta derisa eritrocitet në kontroll të qetësohen plotësisht.

Deklarata e RPGA gjatë titrimit të serumeve të gjakut të testuar

Titrimi i serumeve të provës dhe tretësirës së punës K+ kryhet në rreshta të shkurtër të pllakës. Një rresht tjetër i shkurtër përdoret për të monitoruar mungesën e hemaglutinimit spontan të EDS.

180 μl tretësirë ​​RIP i shtohen puseve të para të rreshtave të shkurtër për titrimin e serumit të testimit. Shtoni 50 μl tretësirë ​​PBS në të gjitha puset e tjera.

20 μl serum testues shtohen në puset me tretësirën RIP (përftohet një hollim 1:10). Secili serum shtohet me majën e tij dhe pipet me kujdes (ngjyra e tretësirës në puse duhet të ndryshojë nga blu-vjollcë në jeshile). Më pas, 50 μl transferohen nga puset e para në puset e radhës, duke përftuar hollime të dyfishta nga 1:20 deri në 1:1280. Në fund të titrimit, tretësirat në një vëllim prej 50 μl hiqen nga pusetat e fundit.

Sa herë që kryhet RPGA, është e nevojshme të kryhet një përcaktim kontrolli i titrit K+. Për ta bërë këtë, shtoni 50 μl zgjidhje PBS në 8 puse në një rresht të gjatë. Më pas në pusin e parë shtoni 50 μl tretësirë ​​pune K+ (1:20), pipet me kujdes dhe kaloj 50 μl në puset e ardhshme, duke përftuar hollime 2-fish nga 1:40 deri në 1:5120.

Për të kontrolluar diagnostifikimin për mungesën e hemaglutinimit spontan, në të gjitha pusetat e një rreshti të shkurtër shtohen 50 μl tretësirë ​​PBS.

25 μl SED shtohen në të gjitha puset (përveç puseve të para të çdo rreshti për serumet e testimit që përmbajnë RIP). Përziejeni suspensionin SED në një shishe ose banjë përpara përdorimit! Tableta tundet mirë dhe lihet në një temperaturë prej 16 deri në 25 ° C për 30 - 40 minuta derisa eritrocitet në kontroll të qetësohen plotësisht.

Kontabiliteti dhe interpretimi i rezultateve

Llogaritja e rezultateve gjatë ekzaminimit të serumit të gjakut

Rezultatet merren parasysh në një shkallë konvencionale prej katër kryqëzimesh. Titri i serumit konsiderohet të jetë hollimi i tij, i cili jep hemaglutinim me të paktën 3 (+++) kryqe.

• ++++ (4+) - eritrocitet e aglutinuara formojnë një "ombrellë" të përmbysur në fund të vrimës, skajet e saj bien;
• +++ (3+) - eritrocitet e aglutinuara formojnë një "ombrellë" të përmbysur në fund të vrimës, skajet e saj janë të lëmuara;
• ++ (2+) - së bashku me eritrocitet e aglutinuara, në fund të pusit ka një sediment në formën e një "unaze" të vogël të eritrociteve jo të aglutinuara;
• + (1+) - shumica e qelizave të kuqe të gjakut nuk aglutinohen dhe vendosen në formën e një "unaze" të vogël;
• (-) - qelizat e kuqe të gjakut jo të aglutinuara formojnë një "pikë" në fund të pusit.

Rezultat pozitiv konsiderohet të jetë hemaglutinimi i eritrociteve të ngarkuara me antigjen Vi me të paktën 3 kryqëzime (+++).

Kontrolli i cilësisë së diagnostifikimit sigurohet nga 4 puse të rreshtit të kontrollit, në të cilat janë shtuar vetëm zgjidhje PBS dhe SED. Nuk duhet të ketë hemaglutinim spontan në këto puse - reagimi është negativ (-). Përndryshe, studimi duhet të përsëritet. Nëse hemaglutinimi shfaqet pas ri-stadifikimit, ilaçi nuk përdoret.

Serumet me rezultat negativ duhet konsideruar se nuk përmbajnë antitrupa ndaj antigjenit Vi me një titër diagnostik 1:40 ose më të ulët.

Serumet që japin rezultat pozitiv në një hollim 1:40 duhet të ritestohen me titrim të serumit për të vendosur titrin e tij.

Llogaritja e rezultateve kur titrohet serumi i gjakut

Titri i serumit konsiderohet të jetë hollimi i tij, i cili jep hemaglutinim të paktën 3 (+++) kryqe.

Kontrolli i cilësisë së diagnostifikimit sigurohet nga puset e rreshtit për monitorimin e EDS. Nuk duhet të ketë hemaglutinim spontan në këto puse - reagimi është negativ (-). Përndryshe, studimi duhet të përsëritet. Nëse hemaglutinimi shfaqet pas ri-stadifikimit, ilaçi nuk përdoret.

Kompleti i reagentit të antigjenit Diagnosticum Salmonella VI është menduar për zbulimin në serumin e gjakut të njeriut të antitrupave specifikë ndaj antigjenit Salmonella typhus VI në një reaksion hemaglutinimi pasiv (RPHA).

1. KARAKTERISTIKAT E SET

2.1. Parimi i metodës.

Parimi aktiv i antigjenit Diagnosticum Salmonella VI është antigjeni Vi i fiksuar në sipërfaqen e qelizave të kuqe të gjakut. Kur ndërveprohet me serumet që përmbajnë antitrupa ndaj antigjenit Vi, vërehet fenomeni i aglutinimit të eritrociteve.

2.2. VENDOSI PËRMBAJTJEN

Reagentët	sasi
Diagnosticum eritrociti salmonella Vi-antigjenik- është një suspension 1% i eritrociteve të deleve të formalizuara dhe të sensibilizuara Salmonella Typhoid me antigjen B në një tretësirë ​​tampon fosfati (pH 7.2 + 0.2; përqendrimi 0.06 mol/l). Pezullim homogjen i ngjyrës kafe pa thekon; pas vendosjes, formohen 2 shtresa: një sediment i dendur kafe i eritrociteve dhe një lëng supernatant transparent me ngjyrë të verdhë.	1 shishe - 3 ml
Serum diagnostikues i salmonelës i receptorit B të absorbuar të thatë - masë homogjene nga e bardha me nuancë kafe në bezhë	1 shishe - 0,1 ml
1% suspension i eritrociteve të deleve të formalizuara dhe të pasensibilizuara— suspension homogjen me ngjyrë kafe pa thekon; pas vendosjes, formohen 2 shtresa: një sediment i dendur kafe i eritrociteve dhe një lëng supernatant transparent me ngjyrë të verdhë.	1 shishe -
Zgjidhje për hollimin e serumit dhe stadifikimin e RPGA - 0.9% zgjidhje klorur natriumi - lëng transparent pa ngjyrë, pH nga 6.5 në 7.5	2 shishe - 8 ml secila
Pllakë me fund të rrumbullakët me përdorim të vetëm për reaksione imunologjike - përbëhet nga 8 rreshta, secila prej të cilave përfshin 12 vrima me një fund transparent, të pangjyrë, të rrumbullakët	1 PC

1. KARAKTERISTIKAT ANALITIKE DHE DIAGNOSTIKE.

3.1. Diagnosticum duhet të aglutinohet në RPHA me serumin diagnostik të Salmonellës të përthithur nga receptori B i thatë në një hollim jo më pak se 1:160.

Niveli i kushtëzuar i karakteristikave diagnostike të serumit të gjakut nga njerëz të shëndetshëm duhet të konsiderohet një hollim i serumit jo më i lartë se 1:20.

3.2. Koha e analizës: 2 orë.

3.3. Kompleti përmban 8 përkufizime.

1. MASAT PARANDALUESE

Kur punoni me kompletin, duhet të respektoni "Rregullat e projektimit, masat paraprake të sigurisë, higjienën industriale, regjimin anti-epidemik dhe higjienën personale kur punoni në laboratorë (departamente, departamente) të institucioneve sanitare dhe epidemiologjike të Ministrisë së Shëndetësisë së BRSS ( M., 1981).

Serumet e analizuara, si dhe reagentët në kontakt me to, duhet të konsiderohen si potencialisht të infektuar, të aftë për të kohe e gjate mbajnë ose transmetojnë HIV, virusin e hepatitit ose ndonjë patogjen tjetër infeksion viral- Duhet të trajtohen me kujdes:

• punoni me doreza gome;
• gjatë vendosjes me pipet është e nevojshme të përdoren dispenzues automatikë;
• pas përfundimit të punës, trajtoni serumet e analizuara dhe reagentët dhe instrumentet në kontakt me to me një tretësirë ​​dezinfektuese
• Fshini pajisjet me alkool etilik 70% para dhe pas përdorimit.

Serumet e analizuara duhet të çaktivizohen në një temperaturë prej 56 0 C për 30 minuta.

Serumi diagnostikues i Salmonellës i përthithur nga receptori B, i përfshirë në komplet, është i thatë dhe i çaktivizuar.

Rezultatet e analizës objektive garantohen nëse plotësohen kushtet e mëposhtme:

• Të gjithë reagentët e kompletit duhet të ruhen në temperatura nga 2 deri në 8 0 C;
• mos përdorni reagentë të skaduar;
• mos përdorni reagentët e kompletit nëse nuk ka shenjë të përshtatshme në paketimin e tyre;
• Për të kryer RPHA, përdorni reagentë të përfshirë vetëm në këtë komplet.

DIAGNOSTIKA(Greqisht, diagnostikos i aftë për të njohur) - suspensione të mikroorganizmave të neutralizuar që përdoren si antigjenë për reaksionet serologjike. Rreziku i punës me kultura të gjalla, aftësia e tyre për të ndryshuar dhe prania e lidhjeve të gjera antigjenike e bëjnë të këshillueshme përdorimin e preparateve D. - më standarde dhe homogjene që përmbajnë disa komponentë antigjenikë.

Me ndihmën e D., reaksionet e aglutinimit, hemaglutinimi pasiv (indirekt) (RPHA) dhe të tjera përdoren për të identifikuar antitrupa specifikë në serumin e njerëzve dhe kafshëve me qëllim të vendosjes së një diagnoze dhe studimit të gjendjes imune të trupit.

D. përdoret veçanërisht gjerësisht në kërkime laboratorike për infeksionet e zorrëve. Megjithatë, struktura e përbashkët antigjenike e baktereve të zorrëve përcakton praninë e reaksioneve të kryqëzuara dhe kërkon zbulim të diferencuar të antitrupave. Për këtë qëllim, kryhet shtypja selektive e antigjeneve individuale: duke përdorur fenol ose formalinë, aglutinueshmëria e O-së shtypet, siç sugjerohet nga Felix dhe Olitzki (A. Felix, L. Olitzki, 1928). Duke trajtuar me alkool sipas metodës Wien dhe Sontag ose me ngrohje sipas Kauffmann-it fitohen O-diagnosticum me antigjen flagjelar të inaktivizuar. Edhe më premtues është përdorimi i mono diagnosticum, parimi i të cilit u zhvillua nga F. G. Bernhof (1944). Këto barna përmbajnë vetëm një komponent antigjenik dhe ato ndërveprojnë vetëm me disa antitrupa specifikë.

Është treguar mundësia e ruajtjes së vetive të D. bakteriale me liofilizimin e tyre (shih).

D., e përdorur për serodiagnozën e infeksioneve të ndryshme, janë thelbësisht të ngjashme, megjithatë, disa lloje të këtyre barnave kanë specifika të caktuara.

Në përgjithësi pranohet se RPGA është më e ndjeshme dhe specifike se aglutinimi bakterial. Eritrocitet e formalizuara të sensibilizuara me antigjenet e përftuara duke përdorur metodat Boivin dhe Westphal përdoren si antigjene në RPGA.

Gjithashtu mund të përdoret eritrociti D. për të zbuluar antigjenin në inde, sekrecione të pacientëve, ekstrakte të substancave të ndryshme etj. Në këto raste përdoren eritrocitet e sensibilizuara me antitrupa - “antibody diagnosticums”.

Viral D. përdoren kryesisht në reaksionin e fiksimit të komplementit (CRF), RTGA dhe reaksionet e neutralizimit. Ato përgatiten nga lëngje kulturash që përmbajnë virus të trajtuar (inaktivizuar) në mënyra të ndryshme.

një përshkrim të shkurtër të kryesore D. dhe fushëveprimi i zbatimit të tyre janë paraqitur në tabelë.

Në punën shkencore përdoren edhe barna eksperimentale: eritrociti colidiagnosticums, eritrociti i difterisë D., antigjenet hemaglutinues të viruseve të shytave, antigjeni hemaglutinues i fruthit etj.

Tabela. Përshkrim i shkurtër i diagnostifikimit kryesor dhe qëllimi i përdorimit të tyre

Diagnostikimet	një përshkrim të shkurtër të	Qëllimi i përdorimit (përdoret serumi i lëndës)
Diagnostifikimi bakterial
Diagnosticum nga bakteret e familjes intestinale: Shigella Flexner, Sonne, Newcastle; Salmonella tifo (OH, O), paratifoi A dhe B, kolera su is, typhimurium, enteritidis	Suspension mikrobik (3 miliardë trupa mikrobikë në 1 ml), i çaktivizuar me 0,4-0,5% solucion formaldehid	Deklarata e një reaksioni aglutinimi për të sqaruar pykën, diagnozën e sëmundjes
Salmonella O-diagnosticums (2, 4, 7, 8, 9 dhe 3, 10)	Suspension mikrobik që përmban O-antigjen të pjesshëm (3 miliardë trupa mikrobikë në 1 ml), i marrë nga shtame të përzgjedhura, i inaktivizuar me solucion glicerine 15%.	Vendosja e një reaksioni aglutinimi për të zbuluar antitrupat O për salmonelozën
Salmonella H-monodiagnosticums (a, b, c, d, eh, c, k, lv, gm, p, st dhe antigjenet e fazës së dytë - 1, 2, 5, 6, 7)	Suspension mikrobik që përmban përbërës të antigjenit flagjelar të fazës 1 dhe 2 (3 miliardë trupa mikrobikë në 1 ml), të marra nga shtame të përzgjedhura, të inaktivizuara me solucion formaline 0,5%.	Kryerja e një reaksioni aglutinimi për të zbuluar antitrupat H për qëllime diagnostikuese dhe për të krijuar një histori të sëmundjes
Vi-diagnosticum	Suspension mikrobik (3 miliardë trupa mikrobikë në 1 ml) nga shtame që përmbajnë Vi-factor, të trajtuar me 0,4% solucion formaline dhe 0,6% solucion klorur kalciumi	Vendosja e një reaksioni aglutinimi për të zbuluar transportin e baktereve tifoide
Diagnostikimi i unifikuar i brucelozës	Pezullim Brucella në tretësirë ​​12%. kripë tryezë, me ngjyrë blu dhe të inaktivizuar me tretësirë ​​fenoli 0,5%.	Skenimi i një reaksioni aglutinimi (reaksioni Wright dhe reagimi Huddleson për të identifikuar njerëzit dhe kafshët e infektuara - shih Bruceloza, metodat e kërkimit)
Tularemia diagnostike	Pezullimi mikrobik (25 miliardë trupa mikrobikë në 1 ml) të shtamit të vaksinës, i inaktivizuar me 0,5% solucion formaldehid	Vendosja e reaksionit vëllimor të aglutinimit të pikave në xhami për serodiagnozën dhe studimin e gjendjes imune të njerëzve të vaksinuar
Diagnostifikimi i leptospirozës	Suspension mikrobial i liofilizuar i 11 shtameve të serotipeve më të zakonshme	Deklarata e RSC për të konfirmuar pykën, diagnozën e sëmundjes
Diagnostikimet rikeciale	Antigjenet korpuskulare - një suspension i rikecisë i rritur në qeset e të verdhës së embrioneve të pulës ose materialit rikecial pulmonar nga brejtësit e infektuar, të trajtuar me eter, celit ose me centrifugim diferencial	Vendosja e një reaksioni aglutinimi për diagnozën diferenciale të infeksioneve rikeciale
Diagnostifikimi i eritrociteve
Diagnostifikimi i eritrociteve nga Shigella Flexner - Sonne	Eritrocitet e formalizuara të sensibilizuara me antigjenet e Boivin, Westphal etj.	Deklarata e RPGA për të sqaruar diagnozën klinike të dizenterisë
Eritrociti Salmonella Vi-diagnosticum	Eritrocitet e formalizuara të sensibilizuara me antigjenin Vi të purifikuar	Deklarata e RPGA për të zbuluar transportin e baktereve tifoide
Salmonella eritrociteve O-diagnosticums (1, 2, 12; 1, 4, 12; 6, 7; 6, 8; 1, 9, 12; 3, 10 dhe komplekse)	1% suspension i eritrociteve të formalizuara të sensibilizuara me antigjenet Boivin, Westphal etj.	Deklarata e RPGA për të sqaruar diagnozën klinike të sëmundjes
Diagnostikimi i eritrociteve të tularemisë së liofilizuar	Qelizat e kuqe të gjakut të formalizuara të liofilizuara të sensibilizuara me antigjenin e tularemisë	Deklarata e RPGA për të sqaruar diagnozën klinike të tularemisë, si dhe reagimin e neutralizimit të antitrupave për të zbuluar: antigjenin
Diagnostifikimi viral
Antigjeni i virusit vaccinia	Përgatitja e thatë e virusit të vaccinia të gjallë të kultivuar në membranën korion-alantoike të embrioneve të pulës	Deklarata e RPGA për zbulimin e antihemaglutininave te pacientët dhe personat e vaksinuar
Antigjen specifik adenoviral	Përgatitur duke kultivuar virusin e tipit 6 në një kulturë të qelizave të vazhdueshme A-1 (antigjen i përbashkët për të gjithë adenoviruset)	Testimi i RSC për të zbuluar antitrupat fiksues të komplementit në serumin e pacientit
Diagnostifikimi i encefalitit të lindur nga rriqrat dhe sëmundjeve etiologjikisht të ngjashme		Deklarata e RSC dhe X-ray për të sqaruar pykën, diagnozën e sëmundjes
Antigjeni i ornitozës	Përgatitje e thatë nga qeskat e verdha të ziera me virus të embrioneve të pulës, ekstraktuar me eter, precipituar me aceton dhe inaktivizuar me mertiolat	Deklarata e RSC për diagnozën e ornitozës tek njerëzit, zogjtë dhe kafshët
Diagnostikimi i gripit të thatë	Lëngu allantoik i embrioneve të pulës në zhvillim të infektuar me një nga shtamet e virusit të gripit të tipit A, B ose C, i inaktivizuar nga formalina, mertiolati. Për shkak të ndryshueshmërisë së strukturës antigjenike të virusit të influencës, sigurohen ndryshime të shpeshta në shtamet e prodhimit.	Deklarata e rrezeve X për të sqaruar diagnozën klinike të sëmundjes
Parainfluenza diagnosticum tipi 1, 2, 3 për RTGA, i thatë	Lëngu i kulturës (veshkat embrionale të njeriut) që përmban një nga shtamet e virusit të parainfluenzës, i trajtuar me Tween-80, eter dhe mertiolat	Deklarata e X-ray për të sqaruar pykën, diagnozën e sëmundjes

Bibliografi: Zuev A. S. Vi-diagnosticum bakterial për identifikimin e bartësve kronikë të baktereve tifoide, Zhurn, mikr., epid, imun., Nr. 2, f. 51, 1959, bibliogr.; Zuev A. S., Novoselova A. I. dhe Likina I. V. Zhvillimi i një metode për prodhimin e O-diagnosticums dhe N-monodiagnosticums dhe përdorimi i tyre në serodiagnozën e salmonelozës, po aty, Nr. 3, f. 42, 1956; Imunologjia dhe parandalimi infeksionet e zorrëve, ed. S. I. Didenko, f. 180, M., 1962; Karalnik B.V. Diagnostikimi i eritrociteve, M., 1976; Udhëzues për diagnozën mikrobiologjike të sëmundjeve infektive, ed. K. I. Matveeva, f. 172, M., 1973; Subbotina Yu. dhe dr. Diagnoza serologjike e salmonelozës dhe lidhjeve antigjenike në reaksionet me eritrocitare dhe O-diagnosticums bakteriale, Zhurn, mikr., epid, i imm., Nr.3, f. 19, 1970, bibliogr.

L. B. Bogoyavlenskaya.

2.diagnosticum

4.nga mikrobet e shkatërruara (izolimi i një Agi specifik)

Diagnostikimi i eritrociteve HBs

2.diagnosticum

4. suspension i deleve ajrore të trajtuara me taninë dhe të precipituar a\g HBs

5. për të zbuluar antitrupa specifikë në serumin e gjakut

Diagnosticum gp120

2.diagnosticum

4.veç një\g psh. HIV

5. për zbulimin e një HIV

Diagnostikimi i eritrociteve tetanoz

2.diagnosticum

4. suspension i er.ram, i trajtuar me taninë dhe a\g tetanus

5. për të zbuluar antitrupa specifikë në serumin e gjakut (për tetanozin

Antigjeni kardiolipin për mikroprecipitim

2.diagnosticum

4.Nxjerrja e fraksioneve lipidike nga zemra e një demi të shëndetshëm

5. për të zbuluar antitrupa specifikë në serumin e gjakut

Antigjeni treponemal tejzanor

2.diagnosticum

4. të vrarë ex. sifilizit

5. për të zbuluar antitrupa specifikë në serumin e gjakut

Diagnostikimi i tularemisë korpuskulare

2.diagnosticum

4.nga grimcat individuale të patogjenit

5. për të zbuluar antitrupa specifikë në serumin e gjakut

Diagnoza e dizenterisë

2.diagnosticum

4. pezullimi nga kafshët e vrara

5.për të zbuluar antitrupa specifikë në serumin e gjakut të pacientit

Diagnostikimi i eritrociteve nga Shigella Sonne

2.diagnosticum

4.pezullimi i er.ramit, i trajtuar me tonin

5. për të zbuluar antitrupa specifikë në serumin e gjakut

Diagnosticum nga Salmonella typhimurium

2.diagnosticum

4. të vrarë ex. salmonelën

5. për të zbuluar antitrupa specifikë në serumin e gjakut

Serumet

Serum kuajsh antigangrenoz 5000 IU

2.serum

4.nga serumi i gjakut të kuajve hiperimmia me një toksoid të gangrenës gazore ngacmuese

6.parenteralisht, pas testit me globulinë 1:100

Imunoglobulina normale njerëzore

2.serum

4.nga serumi i gjakut të dhuruesve

5. kalojë forma-e. specifike blerë artet imm

6.parenteral

Serum precipitues i antraksit

2.serum

4. nga serumi i gjakut i kafshëve të hiperimunizuara a\g exc.sib. ulcerat

6. Reaksioni i reshjeve (RP)

Lloji i serumit botulinum – A 400 IU

2.serum

5. për të zbuluar një antigjen specifik në materialin e testimit

6. Reaksioni i neutralizimit (RN)

Globulina kundër antraksit

2.serum

4.nga serumi i gjakut të kafshëve të hiperimunizuar dhe/ose antraksit

5. kalojë forma-e. specifike blerë artet imm

6.parenteral

Serum hemolitik

2.serum

4.nga serumi i kafshëve të hiperimunizuara me eritrocite të kafshëve të një lloji tjetër

5. për të zbuluar një antigjen specifik në materialin e testimit

Serum aglutinues Ogawa kolera

2.serum

4.nga serumi i gjakut i kafshëve të hiperimunizuara

5. për të zbuluar një antigjen specifik në materialin e testimit

Serum lumineshent i tularemisë

2.serum

4.nga serumi i gjakut i kafshëve të hiperimunizuara a\g përjasht.tular.

5. për të zbuluar një antigjen specifik në materialin e testimit

Imunoglobulina kundër encefalitit të lindur nga rriqrat

2.serum

4.nga serumi i gjakut të dhuruesve

5. kalojë forma-e. specifike blerë artet imm

6.parenteral

Serum diagnostikues ESNO

2.serum

4.nga serumi i gjakut i kafshëve të hiperimunizuara me viruse ESNO

5. për të zbuluar një antigjen specifik në materialin e testimit

Imunoglobulina njerëzore kundër hepatitit B

2.serum

4. Nga serumi i gjakut i një dhuruesi të vaksinuar kundër hepatitit B

5. kalojë forma-e. specifike blerë artet imm

6.parenteral

Serum antiglobulin i etiketuar me peroksidazë

2.serum

4.nga serumi i gjakut i kafshëve të hiperimunizuara

5. për të zbuluar një antigjen specifik në materialin e testimit (HIV)

Imunoglobulina kundër tërbimit

2.serum

4.nga serumi i gjakut të dhuruesve

5. kalojë forma-e. specifike blerë artet imm